Moleküler ağırlığı 23 kDa olan monomerik prolaktin (PRL), yetişkin serum PRL’sinin %95’ine kadarını oluşturur. Makroprolaktin ise, moleküler ağırlığı 100 kDa’dan büyük olan büyük bir antijen-antikor kompleksidir ve dolaşımdaki PRL’nin %1’inden azını oluşturur. Bu nedenle, çoğu durumda hiperprolaktinemi genellikle monomerik PRL’nin yüksek seviyelerinin bir sonucudur ve bu, prolaktinomada olduğu gibi aşırı üretimden veya hipofiz sapının basısıyla oluşan disinhibisyondan kaynaklanabilir.

Serumda prolaktinin (PRL)monomerik formundan başka, iki yüksek moleküler kütleli formu daha jel filtrasyon kromatografisi (GFC) ile tanımlanmıştır: Makroprolaktin (büyük-büyük PRL, > 100 kDa) ve büyük PRL (40-60 kDa). Makroprolaktin değişken bir bileşime ve yapıya sahiptir, ancak en sık olarak 150-170 kDa moleküler kütleye sahip bir PRL ve IgG kompleksidir. Monomerik PRL’nin hipofiz salgılanmasının ardından dolaşımda oluşur, ancak daha uzun bir yarı ömre sahiptir ve kompleksteki PRL, immünolojik analizlerde değişken bir ölçüde reaktif kalır.

Bununla birlikte, makroprolaktineminin bazı bireylerde hiperprolaktineminin bir nedeni olabileceği ve bunun herhangi bir patolojiyle ilişkisi olmayabileceği unutulmamalıdır. Bir hastanın klinik öyküsü ve/veya radyolojik verileri PRL değeriyle uyumsuz olduğunda makroprolaktin varlığından her zaman şüphelenilmelidir.

Bu nedenle, hiperprolaktineminin nedenini gereksiz yere araştırmayı önlemek için yüksek serum PRL seviyelerine sahip tüm hastaların MAKROPROLAKTİN düzeyi taranması yararlı olabilir. Bu, Polietilenglikol çöktürme yöntemi gibi basit laboratuvar testlerinin ortaya çıkmasıyla yakın zamanda kolaylaştırılmıştır, ancak jel filtrasyon kromatografisi ( GFC ) altın standart olmaya devam etmektedir. Makroprolaktineminin hiperprolaktineminin ayırıcı tanısına dahil edilmesi umulmaktadır.

Hastaların çoğunda serumda çok az veya hiç makroprolaktin tespit edilemez, ancak bazı bireylerde dolaşımdaki PRL’nin baskın immünoreaktif bileşeni olabilir ve belirgin hiperprolaktineminin nedeni olabilir.

Yüksek moleküler kütlesi nedeniyle makroprolaktin intravasküler bölmeyle sınırlı gibi görünmektedir ve çok sayıda kanıt, in vivo olarak minimal biyoaktiviteye sahip olduğunu ve patolojik açıdan önemli olmadığını göstermektedir. Bununla birlikte, makroprolaktin kaynaklı hiperprolaktinemi, böyle tanınmazsa tanı karışıklığına ve gereksiz daha fazla araştırma ve tedaviye yol açabilir.

Makroprolaktin, bazı testlerde belirgin hiperprolaktineminin yaygın bir nedenidir ve laboratuvarların, makroprolaktin varlığı için yükselmiş toplam immünoreaktif PRL‘li örnekleri incelemek ve in vivo biyoaktif olduğu bilinen monomerik PRL bileşenini belirlemek için tarama programları başlatması esastır.

Bir dizi tarama testi tanımlanmıştır; makroprolaktinin polietilen glikol ile çökelmesine dayanan en yaygın olarak geçerliliği kanıtlanmış ve uygulanmıştır. GFC ise referans tekniğidir, tarama testlerinde belirsiz sonuçlar vererek örneklerin doğrulanması ve daha fazla araştırılması için yapılmalıdır.

Makroprolaktin ile karşılaştırıldığında, büyük PRL hakkında çok az şey bilinmektedir. Toplam serum PRL’sinin daha tutarlı bir bileşenidir ancak nadiren hiperprolaktineminin nedenidir. Makroprolaktin ve büyük PRL’nin doğası, PRL’nin yüksek molekül kütleli formları arasındaki ilişkiler ve bunların klinik önemi hakkında daha fazla araştırma yapılması gerekmektedir.

Hiperprolaktinemi, klinik endokrinolojide en sık görülen sorunlardan biridir. Hiperprolaktinemi, genellikle bir prolaktinoma nedeniyle oluşan ön hipofiz laktotropik hücreleri tarafından aşırı prolaktin üretimi ile karakterizedir. Prolaktinomalar tüm hipofiz tümörlerinin %40’ını oluşturur.

Prolaktin, süt salgısını başlatmak ve sürdürmek için meme bezine etki eden bir hormondur, bu nedenle premenopozal kadınlarda bulunan konsantrasyonlar, erkeklerde ve postmenopozal kadınlarda bulunan konsantrasyonlara kıyasla daha yüksektir.

Kadınlarda hiperprolaktinemi, süt salgısının başlamasına ve adet döngüsünün düzensizliğine veya kaybına neden olur.

Erkeklerde baş ağrısına ve libidonun veya cinsel gücün azalmasına neden olur.

Tümör kitle etkisi yapacak kadar büyüdüğünde hem erkeklerde hem de kadınlarda görme kaybına ve görme alanı kusurlarına da neden olabilir. Vaka tespiti, prolaktin serum konsantrasyonunun ölçülmesiyle gerçekleştirilir. Bu konsantrasyon yüksek tarafta referans aralığının dışında olduğunda, bir MRI taraması gerçekleştirilir. Ayrıca, hasta görme yeteneğini analiz etmek için bir göz doktoruna gönderilebilir. Hiperprolaktinemi, dopamin antagonisti ile tedavi edilebilir çünkü dopamin, prolaktin salgılanmasının ana inhibitörüdür.

Prolaktin vücutta farklı formlarda dolaşır. Prolaktin çoğunlukla bir monomer (23 kDa) olarak görülür. Daha az sıklıkla monomerik formun bir dimeri olarak görülür; büyük-prolaktin (48 kDa) (<%10) veya monomerik formun immünoglobulinlere, çoğunlukla IgG’lere bağlı kompleksleri olarak görülür; büyük-büyük-prolaktin veya makroprolaktin (>150 kDa).

Büyük prolaktin ve büyük-büyük prolaktin, monomerik forma kıyasla çok düşük biyolojik aktiviteye sahiptir ve hiperprolaktinemiye katkıda bulunmaz.

Ticari olarak temin edilebilen tüm immünolojik testler toplam prolaktini tespit eder. Yüksek konsantrasyonda makroprolaktin (makroprolaktinemi) olan hastalara yanlışlıkla hiperprolaktinemi tanısı konulabilir.

Makroprolaktin, prolaktin oranı bireyler arasında değişir. Prolaktin düzeylerinin hiperprolaktinemik bir durumun gerçek bir yansıması olup olmadığını belirlemek için makroprolaktemiyi dışlamak gerekir. Boyut dışlama kromatografisi (SEC), makroprolaktinin tespiti için “altın standart” olarak kabul edilir. Bu teknik çok zaman alıcı ve pahalıdır ve bu nedenle makroprolaktini serumdan çıkarmak için sıklıkla polietilen glikol (PEG) çökeltmesi kullanılır. PEG seruma eklendiğinde, makroprolaktinin ve büyük prolaktinin kimyasal potansiyeli artar çünkü kimyasal potansiyel doymuş çözeltinin düzeyini aşar. PEG, immünoglobulin G’ye bağlı prolaktini çökeltir ancak monomerik form süpernatantta ölçülebilir kalır.

Serbest PRL konsantrasyonlarını belirlemek için serum örnekleri (50 μL), 50 μL soğuk PEG (molekül ağırlığı 6000, suda %25) ile kuvvetli bir şekilde karıştırılır ve makroprolaktini çıkarmak için 10 dakika boyunca 9.100 xg’de santrifüjlenir. Toplam PRL konsantrasyonlarını belirlemek için serum örnekleri aynı şekilde ancak PEG yerine suyla işlenir.

Yirmi beş gram ( 2.5 g ) PEG 6000 (Merck ® ref. 807491) oda sıcaklığında 6.0 ml distile su (18–25°C) ve santrifüjde karıştırılarak hacim 10 ml’e kadar doldurulur,çözelti oluşur. Bu %25’lik PEG çözeltisinin 250 mikrolitresi veya 500 mikrolitresi oda sıcaklığında (20–25°C) hastanın serumlarının hacmine eşit olacak şekilde birleştirilir ( örneğin 500 PEG + 500 serum ), vortexlenir, daha sonra 9500×g‘de 10 dakika süresince santrifüj edilir.  

1. Birinci Gode : 500 mikrolitre PEG + 500 mikrolitre hastanın serum karışımı

2. İkinci Gode : 500 mikrolitre PEG + 500 mikrolitre serum fizyolojik karışımı  ( Kontrol Numunesi yerine geçer )

Her iki gode de 1400 xg’de 30 dakika santrifüj edilir. Her iki gode üzerindeki süpernatanlar ölçüm yapmak için alınır ve ölçüm yapılır.

Başlangıç-PRL (ön-PEG) ve süpernatant-PRL (sonra-PEG) elektrokemilüminesans metod ile çalışılır.

PRL geri kazanım ” Recovery ” oranı (RR) şu oran ile belirlenir : 

Recovery = ( Süpernatant-PRL / Başlangıç-PRL ) × 100.

Recovery formülünde : Başlangıç prolaktin değeri formüle direk olarak yazılmaz, çünkü aynı şartlar olmalıdır, Yukarıda gösterilen İkinci Gode : 500 mikrolitre PEG + 500 mikrolitre serum fizyolojik karışımı ‘ndaki( Kontrol Numunesi yerine geçer ) ölçüm sonucu yazılır. 

PRL RR’si %40’tan az ise örnekler baskın makroprolaktin formuna sahip olarak sınıflandırılır. Hatta makroprolaktin ile birlikte  + dimerik prolaktin de var demektir.

RR > %60 ise monomerik PRL baskınlığını gösterir ve

RR %40-60 arasında ise belirsiz olarak ( Monomerik PRL + Makro PRL ) sınıflandırılır. Makroprolaktin için pozitif kontrol (RR %37) kullanılmalıdır ( Birleşik Krallık Ulusal Harici Kalite Güvence Planı olan UK NEQAS ® ).

özetle, NORMALDE : 

DİMERİK PRL + MAKRO PRL’nin RECOVERY’si  % 40’dan az olmalıdır.

MonoMERİK PRL + MAKRO PRL’nin RECOVERY’si  % 40 – 60 arasında olunca dikkat  ! 

MonoMERİK PRL‘nin RECOVERY’si  % 60’dan fazla olmalıdır.

Polietilen Glikol  ile inkübasyonun ardından,  serum prolaktinin %60’ından fazlasının çökelmesi , glikol(PEG) + makroprolaktin varlığını düşündürür. Ancak  çökelmemiş prolaktin süpernatanda kalmaktadır. Prolaktin için bu sonuçlar yaş ve cinsiyet’e göre düzenlenmiş referans aralığında değerlendirilmelidir.  Bu sonuçlar’a göre  hiperprolaktinemi  doğru olarak kanıtlanır veya dışlanır.

Kararsız durumlarda prolaktin takibine devam edilmelidir.

Örnek sonuç :

Prolaktin değeri 41.6 ng / ml ölçülmüş ise ; Makroprolaktin mi var yoksa gerçek Hiperprolaktinemi mi var ? PEG çöktürme sonucu :

Süpernatan’da prolaktin düzeyi ölçülür ve Monomerik Prolaktin : 36.6 ng/ ml bulunur.

Demek ki geriye kalan kısım Makro PRL + Big PRL‘dir ve 41.6 -36.6  = 5  ng / ml bulunur.

Recovery hesaplamak için :  ( 36.6 / 41.6 ) = % 87.98 bulunur. % 60’dan büyük olduğu için yüksek değer, monomerik prolaktine aittir.

PRL RR’si %40’tan az ise örneklerde makroprolaktin ile birlikte  + dimerik prolaktin de var demektir.

RR > %60 ise monomerik PRL baskınlığını gösterir ve

RR %40-60 arasında ise  Monomerik PRL + Makro PRL vardır.